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Un système de microscopie biphotonique versatile doté d’un système assurant un balayage rapide du faisceau laser à l’aide d’un système de miroirs oscillants à haute fréquence à été construit. La source est un laser laser femto-seconde ( Tsunami, Spectra-Physics) accordable en longueur d’onde sur une plage de 700 à 1000nm. Deux techniques d’imagerie sont opérationnelles :
la microscopie biphotonique de fluorescence
la microscopie biphotonique de génération de second harmonique
Montage du microscope.
infoLa première consiste à détecter à l’aide d’un photomultiplicateur la fluorescence induite par absorption à deux photons. Le but est de pouvoir suivre l’évolution in situ d’espèces biologiques préalablement marqués par des fluorophores endogènes ou exogènes. Le système permet de sonder les tissus en volume avec une résolution submicronique.
Cellule de racine de tabac : taille d’image 100×100 µm, résolution 0.5 µm.
info
En rouge : cheminement du faisceau laser à 800 nm, en vert : détection du signal de fluorescence.
infoLa seconde technique consiste à détecter les signaux de second harmonique induits par excitation laser, processus également quadratique en fonction de l’intensité de la pompe et possédant ainsi la même résolution spatiale que la fluorescence à deux photons. Elle possède cependant un intérêt propre complémentaire de la technique précédente du fait de sa caractéristique intrinsèque liée à la non-centrosymetrie des systèmes imagés.
Il est à noter que le système construit pour l’imagerie biphotonique est également utilisé pour réaliser des micro- et nano-structures dans des matériaux photopolymérisables par absorption à deux photons.
Institut de Physique et de Chimie des Matériaux de Strasbourg
